六亚甲基四胺是有机合成的原料，在医药工业中用来生产氯霉素。

六亚甲基四胺可用作泌尿系统的消毒剂，其本身无抗菌作用，对革兰氏阴性细菌有效。其20%的溶液可用于治疗腋臭、汗脚、体癣等。它与氢氧化钠和苯酚钠混合，可做防毒面具中的光气吸收剂。

用于制造农药杀虫剂。六亚甲基四胺与发烟硝酸作用，可制得爆炸性极强的旋风炸药，简称RDX。

药品与氯化铵同用可酸化尿液，促进甲醛的释放，增强乌洛托品的疗效。

药品与磷酸盐同用可酸化尿液，促进甲醛的释放，增强乌洛托品的疗效。

药品与维生素C同用可酸化尿液，促进甲醛的释放，增强乌洛托品的疗效。

药品与碳酸氢钠同用可减轻不良反应，但同时也会降低其疗效。

含镁或钙的制酸药、碳酸酐酶抑制药、枸橼酸盐、碳酸氢钠以及噻嗪类利尿药可使尿液变为碱性，影响本药疗效。

药品与磺胺类药物合用时，由于乌洛托品在尿液中分解生成甲醛，能使某些磺胺药形成不溶性沉淀，增加结晶尿出现的危险。